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    国家标准物质乳铁蛋白的分离方法及功效!


    乳铁蛋白(lactoferrin,LF)是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白,中性粒细胞颗粒中具有杀菌活性的单体糖蛋白。其分子量为80 kDa,主要由乳腺上皮细胞表达和分泌。1939年Sorensen等人在分离乳清蛋白时得到一种红色蛋白,Polis等人在分离Lp时也得到部分纯化的红色蛋白,但至1959年Groves用色谱得到纯的红色物质后,才确认这种红色物质是一种与铁结合的糖蛋白,称之为乳铁蛋白。乳铁蛋白不仅参与铁的转运,而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能,被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。


    一、乳铁蛋白的分离方法

    目前报道的Lf分离方法很多,主要有色谱法(吸附色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、固定化单系抗体法等)和超滤法。


    色谱法的优点是分离效果好、纯度高,抗体被固定化可重复使用,其缺点是柱的制备工艺复杂,抗体成本昂贵,难以工业化生产。超滤法操作简便,费用相对较低,易于形成工业化规模,其缺点是乳铁蛋白纯度较低,膜需经常清洗。超滤法是生产食品用乳铁蛋白最具实现工业化潜力的方法之一。


    二、乳铁蛋白的功效

    乳铁蛋白及其蛋白降解产物—乳铁蛋白肽具有广泛的生物学活性,包括广谱抗菌作用、消炎、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等,被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品、化妆品添加剂,如美国食品药品管理局早巳允许乳铁蛋白作为食品添加剂用于运动、功能性食品。


    乳铁蛋白属于先天免疫系统的成分物质。除了能够结合和运输铁离子的主要功能外,乳铁蛋白还具有抗菌,抗病毒,抗寄生虫,催化,防癌抗癌,抗过敏和辐射防护的功能和属性。


    ⒈免疫作用

    奶粉里面的乳铁蛋白有什么作用


    母乳与配方奶粉相比,母乳喂养的婴幼儿能更有效的利用母乳中的营养物质,也不易患各种感染性疾病,保持正常生长和发育,主要是因为母乳中含有乳铁蛋白、免疫球蛋白和溶菌酶等多种活性蛋白,能促进营养成分的消化、吸收,并保护机体免受微生物感染。其中乳铁蛋白还通过促进胃肠道,特别是黏膜免疫系统的正常发育,在机体免疫防疫系统方面起着重要作用,奶粉中添加了乳铁蛋白更接近母乳,从而强化这些免疫因子能增加其免疫功能。


    新生儿的免疫系统约在1岁左右才发育成熟,所以他们的抗感染能力比较大儿童和成人弱,容易发生肠道疾病,使营养摄入受影响,进而影响生长发育水平。乳铁蛋白是母乳中含量丰富的天然成分,约占人乳总蛋白的20%,其营养价值至少有两方面:一是作为氨基酸的膳食蛋白源;二是有利于铁的生物利用。但不是所有的婴儿配方奶粉都含乳铁蛋白,因此婴儿配方奶粉中强化乳铁蛋白使营养成分接近母乳,对出生婴儿的营养需求和生长发育极其重要,可以促进肠道有益菌生长,帮助婴幼儿抵抗大肠杆菌、降低病毒等微生物引起的腹泻、肠炎等婴儿常见疾病,构筑起人生的第一道防线。 研究表明,口服乳铁蛋白安全可靠,无任何副作用。因此,将乳铁蛋白有效合理地应用于普通婴幼儿配方奶粉中,既可满足婴儿生长发育的需要,同时又对婴儿的健康起到保护作用,对非母乳喂养婴幼儿营养的需要尤为重要。


    乳铁蛋白是从牛乳中提取获得的核心营养蛋白质;(每14公斤牛奶中提取1g乳铁蛋白)。乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白。婴儿配方奶粉中爱怡乐添加了乳铁蛋白,对宝宝抵抗力提高很有帮助。乳铁蛋白作用:抗菌和抗病毒,调节免疫机能,抗氧化作用,促进肠道中益生菌群的生长,调节铁的传送。


    LF-乳铁蛋白 是一种与铁的转运和存储有关、能够调节免疫功能等重要作用的蛋白。

    LF-乳铁蛋白 在人初乳中含量最高,成熟乳中含量明显降低。

    中国母乳中LF含量明显低于国外。

    1938年首次从牛乳中被发现,其晶体呈红色。1960年首次被从人乳中分离出来。

    LF-乳铁蛋白由助于运载及促进铁离子吸收

    LF-乳铁蛋白 结合到Fe3+后构象变化使得LF分子结构更趋紧凑不易变性和水解,提高铁离子的溶解性。

    LF-乳铁蛋白 与小肠粘膜细胞表面特异性的LF受体结合,增加铁吸收率!。

    LF对多种免疫细胞都有调节作用!

    LF对先天免疫及应答免疫都有调节作用!


    ⒉抗菌


    目前对乳铁蛋白抗菌活性的研究最深入:它能够结合铁元素,从而能够减少了细菌对铁这种必需元素的吸收,影响细菌的生长。对抗菌作用的另一种作用机制与微生物细胞表面受体有关。乳铁蛋白结合到细菌壁的脂多糖上,其氧化型铁离子能够通过形成过氧化物将细菌氧化。这会影响细胞膜的通透性并导致细胞(裂解)。


    虽然乳铁蛋白还具有其他与铁元素无关的抗菌机制,比如刺激增强免疫吞噬作用,上文所述外的细菌膜的相互作用是最主要最热门的研究方向。乳铁蛋白,不仅破坏了膜,甚至渗透进入细胞。乳铁蛋白能够结合到细菌壁上,与其分子特定的肽段:乳铁蛋白肽相关。此肽段位于乳铁蛋白的N-环端,并经由一些蛋白酶,如胰蛋白酶,在体外降解乳铁蛋白N端产生。相关研究表明,乳铁蛋白能够瞄准 H(+)-ATP酶并干扰胞膜上的质子传递,从而对微生物形成致命的威胁


    ⒊抗病毒


    乳铁蛋白是一种基于DNA/RNA的人类和动物病毒的体外型广谱抗病毒物质。可抵抗:I型和Ⅱ型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、人类免疫性缺陷病毒、丙肝炎病毒、汉坦病毒 、轮状病毒、 I型脊髓灰质炎病毒、人类呼吸道合胞病毒和鼠白血病病毒。


    乳铁蛋白的抗病毒活性研究得最多的机制是它能够阻挡病毒粒子进入靶细胞。许多病毒往往结合到靶细胞膜的脂蛋白上,然后再侵入细胞内。乳铁蛋白结合,从而击退病毒粒子相同脂蛋白。无铁型乳铁蛋白apo-lactoferrin在这方面的效力高于富铁型holo-lactoferrin。另外具有抗(细)菌活力的乳铁蛋白肽并没有抗病毒的特性。


    除了与细胞壁的相互作用,乳铁蛋白也能直接与病毒粒结合,如肝炎病毒。这种抗病毒机制同样在另一种类型细胞中抵抗轮状病毒valaviruses时得到验证。


    乳铁蛋白也抑制病毒在胞内复制。另外,一些间接的抗病毒方式:增加自然杀伤性细胞、粒性白细胞和巨噬细胞的活力/数量,在病毒感染前期发挥关键作用,如急性呼吸系统综合症(SARS)


    ⒋抗真菌


    乳铁蛋白与乳铁蛋白肽能够抑制须癣毛癣菌,而须癣毛癣菌是多种皮肤病,如皮肤癣,的病原真菌。乳铁蛋白还能够杀灭白色念珠菌candida albicans–– 一种引起人类条件性口腔、生殖道感染的二倍体型真菌(酵母的一种形态)。多年来氟康唑一直用于杀灭白色念珠菌, 由此此真菌也对氟康唑产生了抗药性。然而, 若将乳铁蛋白与氟康唑联合使用(先用乳铁蛋白后氟康唑按顺序与念珠菌共孵化),将一样能够杀灭已具有抗药性的念珠菌,比如:C. glabrata,C. krusei,C. parapsilosisandC. tropicalis以及C. albicans(白色念珠菌)。此外, 发现乳铁蛋白肽的抗真菌活力要比乳铁蛋白高, 特别是合成性肽(synthetic peptide) 1-11 乳铁蛋白肽比自然的乳铁蛋白(native lactoferricin)显示出更大的抗真菌活力。


    采用饮用水给药的方法(在饮用水中加入乳铁蛋白)给患有口腔溃疡且免疫低下的小鼠摄入乳铁蛋白,发现实验组口腔中白色念珠菌的数量与其舌头上的受损区面积都减少了。另外一些口腔服药形式的动物显示出在近消化道区域致病菌的数量也在减少。一种混合了乳铁蛋白、溶菌酶与introakonazol的药物,也能够完全清除HⅣ(人类免疫性缺陷病毒)感染者体内的白色念珠菌(HⅣ感染者体内的念珠菌对其他抗真菌药物具有抗药性)。而其他非抗真菌类药物抗菌能力的低效正表明出乳铁蛋白能消灭真菌的性质。相比与抗细菌与抗病毒机制。对乳铁蛋白抗真菌的机制还相知甚少.。一般认为乳铁蛋白能够破坏白色念珠菌的细胞壁并结合到细胞膜上起抗真菌作用。

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