联系我们

联系我们

想了解更多详细信息,请联系我们:

QQ: 692654076

电话:400-077-9993

邮箱:bzwzi8@sina.com

地址:北京市丰台区造甲街11号

超氧化物歧化酶的制备方法!


一、背景及概述


超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)是一类氧化还原金属酶,能清除体内超氧自由基阴离子,有效地预防超氧自由基阴离子对机体的损害作用,是机体内氧自由基的头号杀手,是生命健康之本。SOD酶广泛分布于各种生物体内,如动物、植物、微生物等。


二、制备方法


方法一、


从蒜片加工废水中提取大蒜超氧化物歧化酶的方法:


以多个400目的不锈钢筛网为支撑材料,以200目的硅藻土为过滤介质,将硅藻土料液通过泵循环,预先在不锈钢筛网上均匀涂上5毫米厚的硅藻土过滤层,然后对10立方蒜片加工废水进行过滤,除去蒜片加工废水中的大颗粒杂质和胶体物质;对过滤后的蒜片加工废水打入反应釜,加热到75℃,加热时间20分钟,使蒜片加工废水中的杂蛋白变性絮凝,冷却至30℃,再经硅藻土挂膜过滤后,去除蒜片加工废水中的杂蛋白质;然后将蒜片加工废水经过滤澄清后,用泵打入装有1000公斤超氧化物歧化酶(SOD)分子印迹树脂的树脂柱,控制进样流速500立升/小时,选择性吸附废水中的大蒜超氧化物歧化酶(SOD),大蒜多糖等杂质随废水流出,实现了大蒜超氧化物歧化酶(SOD)与大蒜多糖等杂质的分离;超氧化物歧化酶(SOD)分子印迹树脂吸附饱和后,先用0.5立方去离子水冲洗树脂,然后用200公斤洗脱剂洗脱,控制洗脱流速100立升/小时,收集到含大蒜超氧化物歧化酶(SOD)的洗脱液250公斤;洗脱液经截留分子量20000的聚砜膜浓缩至固体质量百分比含量5%的大蒜超氧化物歧化酶(SOD)浓缩液50公斤;将质量百分比含量5%的大蒜超氧化物歧化酶(SOD)浓缩液,经-55℃的低温冷冻干燥10小时后,得到粉状大蒜超氧化物歧化酶(SOD)3公斤。


大蒜超氧化物歧化酶(SOD)提取率0.05%,大蒜超氧化物歧化酶(SOD)的酶比活性2670U/mg。


方法二、


一种利用结晶法分离提纯超氧化物歧化酶的方法,其特征在于步骤如下:


(1)利用超声破碎仪破碎细菌发酵培养液(功率30%,开5s,停3s,破碎1h),12000rpm离心40min,取上清,用盐酸调节溶液pH=5.0,4℃静置1h后,12000rpm离心40min后取上清,在压力为0.5Mpa下,用截留分子量为3KDa的超滤膜,将上清浓缩至30mg/mL;


(2)将沉淀剂溶解在0.1mM,pH3.0的柠檬酸溶液中,配制成40mg/mL的PEG8000沉淀剂溶液,按1:1的体积比加入到步骤(1)中的蛋白溶液中,混合均匀后加入200uL的籽晶,置于4℃控温箱中搅拌结晶,搅拌速度为200rpm;


(3)将步骤(2)结晶完成后的溶液4℃、12000rpm离心30min取沉淀,所得沉淀即为超氧化物歧化酶晶体混合物;


(4)在步骤(3)中所得的溶液中加入40mg/mL的PEG8000溶液,缓慢搅拌混匀后,离心弃上清,重复该过程三次以彻底清洗晶体。


(5)以相同的结晶条件,结晶方法,重复结晶两次以上,以得到更高纯度的超氧化物歧化酶晶体。


(6)将步骤(5)所得晶体溶液冷冻干燥,得到超氧化物歧化酶纯度为95%,比活力为4335U/mg。


  • 上一篇:草酸亚铁的发明内容与具体实施方式!