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如何分析乳制品中核苷酸的方法

乳粉中添加尿苷酸(UMP)、胞苷酸(CMP)、腺苷酸(AMP)、鸟苷酸(GMP)、肌苷酸(IMP)等多种核苷酸,用来提高婴儿的免疫调节功能和记忆力。那么如何分析乳酸中核苷酸含量呢?

核苷酸分析目前存在的挑战:

由于核苷酸极性很大,用反相色谱柱很难达到很好的保留和分离,所以为了提高核苷酸的保留往往会尝试离子对色谱方法,离子对色谱方法存在以下问题:

1.   容易起泡,管路中有气泡,影响分析

2.   平衡时间长,延长了分析工作时间

3.   难以清洗,对色谱柱有损伤

4.   易变质,容易堵塞管路,损伤仪器

 

解决方案:

1.   避免使用离子对试剂,仅需要使用挥发性乙酸铵、乙腈体系

2.   建议使用Oasis® HLB SPE小柱利用通过净化方式进行乳粉样品前处理,提供更洁净的样品,提高灵敏度、延长色谱柱及仪器寿命

3.   使用Amide色谱柱分析,用一般反相流动相保留极性化合物,方法简单快速

 

实验结果及色谱图

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5种核苷酸混合标准品的6针连续进样分析结果

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实际样品6针连续进样分析图谱

    小结:

    本实验采用WatersACQUITYUPLC®H-Class系统,BEHTMAmide1.7μm2.1*100mm色谱柱,对婴幼儿奶粉中的5种核苷酸进行分析方法的开发,实验结果表明:

    1.在WatersACQUITYUPLCH-Class系统上,采用BEHAmide1.7μm2.1*100mm色谱柱能迅速分离奶粉中5种核苷酸标准品,且5种化合物的分离度均在3.0以上;对于实际的奶粉样品,5种核苷酸样品及杂质之间的分离度均在1.6以上。

    2.该分析方法重现性好。其中,奶粉样品6次连续进样分析结果中,5种核苷酸保留时间RSD值均小于0.12%。

    3.WatersACQUITYUPLCH-Class系统,具有四元溶剂的Auto•BlendPlusTM功能,因此,在该系统上进行方法开发非常灵活、方便,节约了溶剂配置的大量时间,大大提高了实验的效率,从而大幅度的降低了实验的溶剂消耗,降低了实验成本。

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