联系我们

联系我们

想了解更多详细信息,请联系我们:

QQ: 692654076

电话:400-077-9993

邮箱:bzwzi8@sina.com

地址:北京市丰台区造甲街11号

人肌酸激酶(CK)ELISA 试剂盒的应用!


一、背景


人肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人肌酸激酶(CK)的含量。


二、实验原理


试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人肌酸激酶(CK)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肌酸激酶(CK)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。


三、样本处理及要求


1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


3、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


四、操作步骤


1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。


2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;


3、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。


4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。


5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。


6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。


7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


五、实验结果计算


以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。


六、应用


用于母体血清中CK、AFP联合β-hCG对产前胎盘植入的预测价值研究:


1、探讨母体血清中肌酸激酶(Creatine kinase,CK)、甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)及β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin,β-hCG)单项指标对产前胎盘植入(Placenta increta,PIA)的预测价值;


2、探讨母体血清中CK、AFP及β-hCG三项指标联合预测胎盘植入的预测价值;


3、计算出母体血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值(Cut off value,cut off值)。


方法:收集存在发生胎盘植入高危因素且以剖宫产终止妊娠的孕妇102例。根据术中所见及术后病理组织学诊断(子宫平滑肌中可见绒毛)分为胎盘植入组及非胎盘植入组,胎盘植入组包括胎盘粘连28例,胎盘植入20例,穿透性胎盘植入2例,共50例,即实验组;将具有相同或相似高危因素而未发生胎盘植入的孕妇52例为非胎盘植入组,即对照组,同时随机选择以剖宫产终止妊娠而无高危因素的正常孕妇60例为空白对照组。


选择SPSS25.0进行数据统计,计量数据采用(`X±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC曲线),并计算曲线下面积(Area under curve,AUC),得出CK、AFP及β-hCG单独预测胎盘植入的灵敏度、特异度、诊断符合率及三者联合预测胎盘植入的灵敏度、特异度、诊断符合率,利用约登指数计算出CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的cut off值。当P<0.05时,差异具有统计学意义。


高危因素:剖宫产手术史、高龄产妇、多次生产史、多次刮宫及人流等宫腔内操作史。


结果:实验组孕妇血清中CK、AFP及β-hCG水平显著高于对照组及空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);血清CK对胎盘植入的敏感度为42.67%,特异度52.68%,诊断符合率69.72%,血清AFP对胎盘植入的敏感度为65.78%,特异度60.24%,诊断符合率71.68%,血清β-hCG对胎盘植入的敏感度为67.38%,特异度69.46%,诊断符合率73.09%,三者联合对预测胎盘植入的灵敏度分别为:79.04%,特异度分别为:81.57%,诊断符合率80.67%;实验组孕妇血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值分别是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。


结论:1、实验组母体血清中CK、AFP及β-hCG的水平均明显高于对照组及空白对照组;


2、母体血清中CK、AFP及β-hCG对胎盘植入具有一定的预测价值,尤其三者联合筛查对产前胎盘植入的预测价值明显升高;


3、实验组母体血清中CK、AFP及β-hCG预测胎盘植入的临界值分别是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。


  • 上一篇:实验室里洁净工作台的特点与优点!