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尿素检测试剂盒的操作步骤与应用!


一、背景


尿素检测试剂盒用于对人血清、血浆以及尿液中的尿素及尿素氮进行体外诊断的定量检测。


尿素检测试剂盒又称尿素氮(BUN)检测试剂盒,脲酶波氏法测定血清等样本的尿素浓度,不适用尿液。尿素(旧称尿素氮BUN)在尿素酶的作用下水解成氨,氨与苯酚和次氯酸盐反应,生成蓝色产物,其生成量与尿素含量呈正比,酶标仪340nm比色检测吸光度。


尿素检测试剂盒主要成分:尿素试剂瓶:尿酸酶,谷氨酸脱氢酶,a-氧化谷氨酸,ADP;UN-NADH试剂:NADH。


测定原理:在碱性条件下,尿酶水解尿素产生氨,氨与次氯酸反应生成氯胺,再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚,在630nm处有特征吸收峰。


测定意义:尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。


二、操作步骤


1、样本处理


组织:按照质量(g)﹕蒸馏水体积(mL)为1﹕5-10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水),冰上匀浆后于4℃,13000g离心15min,取上清待测。


细菌或细胞:按照细胞数量(104个)﹕蒸馏水体积(mL)为500-1000﹕1的比例(建议500万个细胞加入1mL蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min);然后4℃,13000g离心15min,取上清置于冰上待测。血清(浆)或其它液体:直接检测。


2、测定步骤


分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至630nm,分光光度计蒸馏水调零。


1mg/mL尿素氮标准液用蒸馏水稀释至25μg/mL备用。


三、应用


用于猕猴骨髓间充质干细胞治疗肝纤维化和骨关节炎的研究及玻璃化冻存对干细胞生物学特性的影响研究:


探讨猕猴MSCs在患肝脏等疾病的动物体内的分化、定植、跟踪及相应的临床研究提供重要的理论、技术和应用参考,同时也为MSCs冻存条件的优化提供有益信息。


从猕猴骨髓中通过差速贴壁的方法分离得到的梭状或纤维状的细胞,通过对其表面蛋白分子及成脂、成骨和成软骨细胞分化潜能的综合鉴定,并对照国际细胞治疗协会(ISCT)对MSCs的鉴定标准,证实分离得到可靠的MSCs,为以下的MSCs一系列进一步研究奠定了细胞材料基础。


通过形态观察、糖原染色、尿素检测、肝特异性基因表达等比较分析证明了骨髓MSCs的肝向分化潜能大于大网膜脂肪MSCs。


分别采用绿色荧光蛋白(GFP)和新型超顺磁纳米铁(MIRB)标记猕猴骨髓MSCs,通过对标记率、增殖力和分化能力方面检测发现,标记率均可达到98%以上,而且标记后并没有影响MSCs的增殖活力和功能。MSCs的两种标记方法不仅能满足体外组织切片的荧光检测,同时可通过核磁共振跟踪输注在体内的MSCs,对了解进入体内的MSCs的迁移、归巢、定植和MSCs的命运归宿具有重要意义。


成功建立了二甲基亚硝按(DMNA)诱导的猕猴肝纤维化模型和四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型。


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