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大鼠载脂蛋白C3(APO-C3)ELISA试剂盒的应用!


一、背景


大鼠载脂蛋白C3(APO-C3)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法检测样品中人载脂蛋白C3(APO C3)的水平。


实验原理往预先包被人载脂蛋白C3(Apo-C3)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人载脂蛋白C3(Apo-C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。


二、操作步骤


1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。


2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;


3、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。


4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。


5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。


6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。


7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


三、应用


用于刺络泻血对高脂血症模型大鼠ApoC3及LPL的影响研究:


采用高脂饲料投喂法建立高脂血症大鼠模型,从载脂蛋白C3及脂蛋白脂肪酶两个方面,对刺络泻血千预高脂血症大鼠的降脂效果进行评估,并对其干预高脂血症的作用机制进行探讨。


方法:


1、实验分组:将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、刺络泻血组、阳性药物组4组。各组大鼠均在实验前适应性饲养1周。


2、造模方法:在本研究中,采用国内普遍使用的高脂饲料投喂法造模。具体方法:将雄性SD大鼠以高脂词料喂养造模,高脂饲料的配方为:82.89%基础饲料、1%胆固醇、10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶,5%蛋黄粉和1%%胆酸钠,造模持续28天。


3、干预方法:(1)空白对照组:常规饲养8周,不做任何处理,从第5周开始,去离子水灌胃,仅抓取、按压,每周2次;(2)模型对照组:高脂词料喂养8周,从第5周开始,去离子水灌胃,仅抓取、按压,每周2次;(3)刺络泻血组:高脂词料喂养8周,从第5周开始,去离子水灌胃,丰隆,足三里刺络泻血,出血量为0.3ml-0.5ml(换算公式为出血量=体质量*7.4%*2%),每周2次;(4)阳性药物组:高脂饲料喂养8周,从第5周后开始,按照1.8mg/(kg*d)立普妥灌胃,每周2次。


4、指标检测及方法:采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中血脂四项、ApoC3的含量及LPL的活性。


结果:


1、各组大鼠血脂四项的变化实验结束后,与正常对照组相比,模型对照组TC、LDL含量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组TC、LDL含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);刺络泻血组与阳性药物组比较,血脂四项含量无显著差异(P>0.05)。


2、各组大鼠ApoC3的含量及LPL的活性变化(1)ApoC3的含量变化:与正常对照组相比,模型对照组ApoC3含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组ApoC3含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);刺络泻血组与阳性药物组比较,ApoC3含量无显著差异(P>0.05)。(2)LPL活性的变化:与正常对照组相比,模型对照组LPL活性无显著差异(P>0.05);与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组LPL活性物显著差异(P>0.05);刺络泻血组与阳性药物组比较,LPL活性无显著差异(P>0.05);各组间均无显著差异。


结论:


1、大鼠“丰隆穴”、“足三里穴”刺络泻血,能够有效降低血清中TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C含量,稳定血脂水平。


2、大鼠“丰隆穴”、“足三里穴”刺络泻血,能降低血清ApoC3的含量、不影响LPL的活性。


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